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PCR即聚合酶鏈反應(yīng)，是利用一段DNA為模板，PCR檢測方法在臨床上快速診斷細菌性傳染病等方面具有極為重要的意義。近日，重慶市一項使用PCR檢測方法的相關(guān)標準完成備案——《基于plo基因的山羊化膿隱秘桿菌PCR檢測方法》，并計劃于9月1日起實施。

DB50/T 1244-2022 基于plo基因的山羊化膿隱秘桿菌PCR檢測方法

《基于plo基因的山羊化膿隱秘桿菌PCR檢測方法》規(guī)定了基于plo基因的山羊化膿隱秘桿菌PCR檢測方法的縮略語、原理、試劑材料、儀器設(shè)備、方法步驟、結(jié)果判定、廢棄物處理等要求。此文件適用于山羊化膿隱秘桿菌病的PCR診斷。

文件針對山羊化膿隱秘桿菌的plo基因，設(shè)計合成特異引物，提取細菌DNA作為模板，在DNA聚合酶的作用下，經(jīng)高溫變性、低溫退火和中溫延伸的多次循環(huán)，使特異DNA片段的拷貝數(shù)放大數(shù)百萬倍。將擴增的DNA片段經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，凝膠成像儀觀察，可見陽性條帶。該檢測方法，只能從化膿隱秘桿菌基因組DNA中擴增出特異條帶。

文件中介紹到的試劑材料包括無水乙醇、核酸染料、DNA上樣緩沖液、瓊脂糖、TSA固體培養(yǎng)基、TSB液體培養(yǎng)基、TAE電泳緩沖液等。介紹的儀器設(shè)備包括電子天平、高壓滅菌鍋、高速離心機、二級生物安全柜、恒溫培養(yǎng)箱、PCR儀、電泳儀等。

另外，文件對工作中樣品的采集與保存、樣品的處理、DNA的提取、PCR擴增等過程也進行了詳細的闡述。要求檢測結(jié)果成立的條件為陽性對照PCR產(chǎn)物經(jīng)電泳后在264bp出現(xiàn)目的條帶，陰性對照PCR產(chǎn)物電泳后沒有條帶，并對結(jié)果描述及判定做了詳細說明。

文件詳情請見附件。

關(guān)鍵詞： 方法步驟 聚合酶鏈反應(yīng) 廢棄物處理